TRANSFORMING GROWTH FACTOR BETA HAS DUAL EFFECTS ON MMP9 AND uPA EXPRESSION IN HTR-8/SVneo HUMAN TROPHOBLASTIC CELL LINE / El factor de crecimiento transformante beta tiene efecto dual en la expresión de MMP9 y uPA en la línea celular de trofoblasto _HTR-8/SVneo

ABSTRACT Invasion of trophoblast into endometrium is vital for successful pregnancy development. MMP9 and uPA are key proteases in this process, but it is still not clear the regulation of its expression by Transforming Growth Factor Beta (TGF-β), a known negative regulator of trophoblast invasion. We evaluated the effect of TGF-β on the transcriptional expression of uPA and MMP9 over time, in HTR-8/SVneo trophoblast cells cultured with or without 0.5 % fetal bovine serum, via RT qPCR. The involved transcription factors and signaling pathways were analyzed in silico, using Proscan, Enrich, PCViz and Wiki Pathway. Results showed that TGF-β temporarily regulates the expression of uPA and MMP9. Serum modified the nature of TGF-β's effects on uPA expression, from negative without serum to positive with it, showing opposite effects on MMP9 expression. In silico analysis evidenced different transcription factors for each protease, some belonging to TGF-β signaling pathway, and crosstalk with MAPK and Wnt/β -catenin pathways. The TGF-β dual role is discussed proposing that serum affects the cellular context. Transcriptional regulation of MMP9 and uPA by TGF-β is differential and depends on serum presence and evaluation time.

RESUMEN La invasión del trofoblasto al endometrio es vital para el correcto desarrollo del embarazo. Las proteasas MMP9 y uPA son claves en este proceso, pero aún no es clara la regulación de su expresión por parte del Factor de Crecimiento Transformante beta (TGF-β), conocido por sus acciones no invasivas sobre el trofoblasto. En este trabajo evaluamos el efecto del TGF-β sobre la expresión transcripcional de uPA y MMP9 en células de la línea de trofoblasto HTR-8/SVneo cultivadas con o sin suero fetal bovino al 0,5 %, mediante RT qPCR. Se analizaron in sillico los potenciales factores de transcripción y vías de señalización involucradas empleando Proscan, Enrich, PCViz y WikiPathway. Los resultados muestran que el TGF-β regula temporalmente la expresión de uPA y MMP9. El suero modificó la naturaleza del efecto del TGF-β sobre la expresión de uPA, de negativo en ausencia de suero a positivo en presencia de este, presentando efectos opuestos para la expresión de MMP9. El análisis in sillico evidenció diferentes factores de transcripción para cada proteasa, algunos pertenecientes a la vía de señalización del TGF-β, y un entrecruzamiento con la vía MAPK y Wnt/β-catenina. Los resultados sugieren que la regulación transcripcional de MMP9 y uPA por parte del TGF-β es diferencial y depende de la presencia de suero y tiempo de evaluación.

Implementación de una metodología para la separación de proteomas de plasma humano mediante electroforesis bidimensional / Implementation of a methodology to separate human plasma proteomes by two-dimensional electrophoresis / Implementação de uma metodologia para a separação do proteoma do plasma humano por eletroforese bidimensional

En este trabajo se implementaron las condiciones para la separación de proteomas de plasma sanguíneo por electroforesis bidimensional. En muestras de plasma de infante y adulto se evaluaron dos sistemas de pretratamiento de la muestra para reducir el rango dinámico de las proteínas: inmunodepleción de proteínas abundantes y enriquecimiento de proteínas de baja abundancia. Los proteomas se separaron por electroforesis bidimensional y las imágenes se analizaron con el programa Melanie 7.0. Se encontró que ambos métodos de pretratamiento fueron reproducibles y permitieron ver las diferencias en los proteomas de infante y adulto, como muestran los análisis de componentes principales y de clasificación jerárquica tipo heatmap. El porcentaje de recuperación de proteínas fue mayor con la inmunodepleción en comparación con el enriquecimiento proteico. Estos resultados permitieron concluir que con la inmunodepleción, se tiene mayor control de las proteínas eliminadas y por tanto menor pérdida de información, lo que permite su aplicación en estudios exploratorios para la identificación de potenciales biomarcadores de enfermedad.

The conditions to separate blood plasma proteomes by two-dimensional electrophoresis were implemented. In plasma samples from infant and adult two sample pretreatment systems to reduce the proteins dynamic range were evaluated: Immunodepletion of abundant proteins and protein-enrichment of low abundance proteins. Proteomes were separated by two-dimensional electrophoresis and the images were analyzed using Melanie 7.0. It was found that both pretreatment methods were reproducible and allowed to see the differences in the proteomes of infant and adult, as evidenced by the principal component analysis and heatmap, a type of hierarchic classification. The percent recovery of proteins was greater with the immunodepletion method, compared to the protein enrichment system. With these results, we conclude that reducing the complexity of plasma by immunoaffinity showed better control of unrecovered proteins and therefore less loss of information, which allows its application on exploratory studies to identify potential biomarkers of disease.

O objetivo deste trabalho foi otimizar as condições para a separação de proteomas do plasma sanguíneo por eletroforese bidimensional para sua aplicação na procura de potenciais biomarcadores. Trabalhou-se com amostras de plasma de crianças e adultos, avaliando dois sistemas de pre-tratamento da amostra para diminuir o espectro dinâmico das proteínas, imunodepleção de proteínas abundantes e enriquecimento de proteínas de baixa abundância. Os proteomas foram separados por eletroforese bidimensional e as imagens foram analisadas com o programa Melanie 7.0. Foi encontrado que ambos métodos de pre-tratamento foram reprodutíveis e permitiram observar as diferenças nos proteomas de crianças e adultos, como foram evidenciadas com as análises de componentes principais e de classificação hierárquica tipo heatmap. A porcentagem de recuperação de proteínas foi maior na imunodepleção do que obtido pelo enriquecimento proteico. Estes resultados permitiram concluir que com a imunodepleção há um controle mais eficiente das proteínas eliminadas e assim uma menor perda de informação, isto permite sua aplicação em estudos exploratórios orientados na identificação de potenciais biomarcadores da doença.

Structural features of the two-component systemLisR/LisK suggests multiple responses for the adaptation and survival of Listeria monocytogenes

Se caracterizó la estructura del sistema deregulación de dos componentes LisR/LisK de Listeriamonocytogenes. Se emplearon herramientas bioinformáticas ybases de datos para predecir la estructura e interacciones delas dos proteínas y se modelaron. Los resultados predicenque la proteína LisK está embebida en la membrana celulary su composición modular (dominios HAMP, histidinakinasa and ATPasa) está asociada a su autofosforilación(His-266). Un efecto estímulo respuesta determina lapropagación secuencial de la señal desde la membranacelular hacia componentes citoplasmáticos. A su vez, sepredice que LisR es una proteína citosólica con un dominiode receptor (homólogo a cheY) que incluye el residuofosfo-aceptor (Asp-52) y el dominio de unión a ADN,el cual puede permitir la transmisión de una respuestaespecífica a nivel transcripcional. Los componentes LisR/LisK han sido bioquímica y funcionalmente caracterizadosexperimentalmente en la patofisiología de otros bacilos. Espor ello, que la aproximación de los resultados basados enestructura-función podría facilitar el diseño de inhibidoresespecíficos...

Here, we characterized the structure of the two-component regulatory system, LisR/LisK, in Listeriamonocytogenes. To predict the structure of both proteins and the relationship between them, we employedseveral bioinformatic tools and databases. Based on our results, LisK protein is embedded in the cellmembrane and its modular composition (HAMP, histidine kinase and ATPase domains) is associatedwith its autophosphorylation (His-266). A stimulus-response likely determines the sequential signalpropagation from the bacterial cell surface to its cytoplasmic components. According to our results,LisR is a cytoplasmic protein with a receptor domain (homologous to CheY) that comprises a phosphoacceptorresidue (Asp-52) and a DNA-binding domain, which may allow the transmission of a specifictranscriptional response. LisR/LisK has been experimentally characterized both biochemically andfunctionally in other Bacilli pathophysiology; our structure-function approach may facilitate the design ofsuitable inhibitors...

O objetivo do estudo foi caracterizarestruturalmente o sistema de regulação de dois componentesLisR/LisK de Listeria monocytogenes. Foram utilizadasdiversas ferramentas de bioinformática e bancos de dadospara predizer a estrutura das duas proteínas, modelálase prever suas interações. Os resultados predizemque a proteína Lisk está incorporada na composição damembrana celular e sua composição modular (domíniosHAMP, histidina quinase e ATPase) está associada com asua autofosforilação (His-266). Um efeito de estímulo eresposta determina a propagação sequencial do sinal a partirda membrana celular em componentes citoplasmáticos. Osresultados predizem que LisR é uma proteína citosólicacom um domínio recetor (homólogo a CheY) que inclui oresíduo fosfo-aceitador (Asp-52) e o domínio de ligação aoADN, o que pode permitir a transmissão de uma respostaespecífica a nível transcricional. Como LisR/Lisk foi,química e funcionalmente, caracterizada experimentalmentena fisiopatologia de outros bacilos, esta abordagem baseadana estrutura-função pode facilitar a conceção de inibidoresespecíficos...

Igf-ii y la gonddotropina coriónica regulan la roliferación, migración e invassión de células de trofoblasto humano / IGF-II and Chorionic Gonadotropin Regulate Proliferation, Migration and Invasion of Human Trophoblast Cells

Son conocidas las propiedades del factor de crecimiento similar a la insulina tipo II (IGF-II) y de la hormona gonadotropina coriónica (hCG) en implantación y migración trofoblástica; sin embargo, los mecanismos moleculares a través de los cuales ejercen sus efectos no están completamente caracterizados. El objetivo de este estudio fue establecer la interacción potencial entre los efectos funcionales de hCG e IGF-II en la regulación de la proliferación, migración e invasión trofoblástica. Utilizando la línea celular HTR-8/SVneo de trofoblasto extravelloso se estableció que IGF-II promueve la proliferación celular y de manera novedosa se demostró que hCG, a concentraciones elevadas, es capaz de estimular la proliferación trofoblástica, a través de un mecanismo independiente al empleado por IGF-II. En contraste, la capacidad invasiva del trofoblasto fue regulada por IGF-II y hCG, planteando la existencia de un efecto aditivo en sus acciones. En conclusión, nuestros resultados demuestran el papel de hCG e IGF-II en la regulación de la proliferación e invasión del trofoblasto y plantean la existencia de interacciones a nivel de sus acciones biológicas, contribuyendo a un mejor entendimiento de la biología del trofoblasto y sus patologías.

Both IGF-II and chorionic gonadotropin (hCG) are important regulators of human trophoblast migration and implantation; however the molecular mechanisms are not fully understood. The purpose of this study was to determine the potential cross-talk between functional effects of hCG and IGF-II in the regulation of trophoblast proliferation, migration and invasion. Using the HTR-8/SVneo trophobast cell line we found that IGF-II stimulates cell proliferation and, for the first time we demonstrate that hCG at high doses is able to promote trophoblast proliferation through a mechanism independent of IGF-II. In contrast, trophoblast invasiveness was regulated by both IGF-II and hCG and an additive effect between the two hormones was observed. In conclusion, our results demonstrate cross-talk between the biological activities of IGF-II and hCG in the regulation of trophoblast invasiveness and contribute to a better understanding of the trophoblast biology and pathology.

El igf-ii estimlla la actividad de mmp-9 y mmp-2 en un modelo de trofoblasto humano / IGF-II Stimulates MMP-9 and MMP-2 Activity in a Human Trophoblast Model

La invasión del útero por el trofoblasto extravelloso de placenta de primer trimestre (EVCT) depende de la secreción de metaloproteasas de matriz (MMPs) que degradan la matriz extracelular y dentro de las cuales las gelatinasas MMP-9 y MMP-2 juegan un papel muy importante. El objetivo de este trabajo fue determinar el efecto de los ligandos del sistema de factores de crecimiento similares a la insulina (IGF) en la actividad de gelatinasas en una línea celular establecida de trofoblasto extravelloso invasivo, HTR8/SVneo. Mediante ensayos de zimografía se encontró que el tratamiento con IGF-II 10 nM estimula la actividad de proMMP-9 y proMMP-2 con un máximo a las 24 horas. Dosis mayores de IGF-II mostraron un efecto inhibitorio en la actividad proteasa. Adicionalmente, el IGFII 10 nM estimuló la actividad de otras dos gelatinasas no identificadas de peso molecular 52 kDa tras tratamiento por 24 horas. Ni la insulina ni el IGF-I en concentraciones 10 nM mostraron un efecto estimulador en la actividad de las gelatinasas. Estos resultados muestran el papel potencial del sistema IGF en la regulación de la invasión celular y ayudan a comprender el desarrollo del crecimiento maligno.

Invasion of the uterus by first trimester placental extravillous trophoblast (EVT) cells depends on matrix metalloproteinase (MMPs) secretion to degrade the extracellular matrix; among these, MMP-2 and MMP-9 gelatinases play a pivotal role. The aim of this work was to determine the effect of ligands of the insulin-like growth factor system (IGF) on gelatinase activity in HTR8/Svneo cells, a well-established invasive extravillous trophoblast cell line. By zymography assay, we found that treatment with 10 nM IGF-II stimulates proMMP-9 and proMMP-2 activity with a peak at 24 hours, whereas higher IGF-II doses showed an inhibitory effect on the protease activity. Additionally, IGF-II stimulation resulted in the activation of two other gelatinases, with MW around 52 kDa, which remain to be identified. Neither insulin nor IGF-I were able to stimulate the activity of gelatinases at the time and doses utilized in this study. These results support the potential role of the IGF system in the regulation of cell invasion and malignant growth.

Señalización asociada al receptor del factor de crecimiento similar a la insulina de tipo I en una línea celular colombiana de carcinoma mamario / Insulin-like growth factor receptor I signaling in a breast cancer cell line

Introducción. Varios estudios in vitro sugieren que la proliferación, migración y supervivencia en líneas celulares de cáncer de seno se ven significativamente afectadas por la activación del receptor IGF de tipo I (Insulin-like Growth Factor-I Receptor, IGF-IR).Objetivo. Caracterizar la fosforilación del IGF-IR y las moléculas de señalización intracelular Akt y Erk1/2 (vías de señalización PI-3K y MAPK, respectivamente), causada por el factor IGF-I en una línea celular colombiana de cáncer de mama ductal infiltrante (CSC 1595). Materiales y métodos. Las líneas celulares CSC 1595 y MCF-7 se cultivaron en medio DMEM con suplemento de suero fetal bovino 10%, glutamina 2 mM, penicilina 100 U/ml, estreptomicina 100 µg/ml a 37 0C, atmósfera de CO2 al 5% y humedad de 95%. Los extractos celulares se sometieron a inmunoprecipitación e inmunodetección con anticuerpos específicos anti-pIGF-IR, anti-pERK1/2 y anti-pAkt. Resultados. Cinco minutos después del estímulo con 10 nM de IGF-I, 70% y 25% del IGF-IR fueron fosforilados en las células CSC 1595 y MCF-7, respectivamente; también se observó activación de las proteínas Akt y ERK1/2. Los niveles basales y estimulados de las proteínas ERK1/2 fueron significativamente más altos en las células CSC 1595, comparados a los observados en MCF-7. Conclusiones. El IGF-IR y la vía MAPK cinasa que involucra las proteínas ERK1/2 muestran una fosforilación mayor en las células 1595 a la observada en las MCF-7. El IGF-IR, principal activador de esta vía, podría jugar un papel importante en los procesos de proliferación y metástasis de tumores de cáncer de mama ductal infiltrante.

Introduction. In vitro studies strongly suggest that proliferation, migration and cell survival of breast cancer cell lines are significantly affected by activation of the IGF type 1 receptor (IGF-IR).Objective. The phosphorylation by IGF-I of IGF-IR and the intracellular signaling molecules Akt (PI-3K pathway) and Erk1/2 (MAPK pathway) was characterized in a human breast cancer cell lines. Materials and methods. The study compared a standard breast adenocarcinoma line (MCF-7) cell line with a line (CSC 1595) derived from an infiltrating ductal breast cancer in a Colombian patient. The CSC 1595 and MCF-7 cell lines were cultured in DMEM supplemented with 10% fetal bovine serum, 2 mM glutamine, 100 U/ml penicillin, and 100 µg/ml streptomycin and grown at 37°C in 5% CO2 atmosphere and 95% humidity. Cell extracts were prepared, followed by immunoprecipitation and immunoblotting with specific anti-pIGF-IR, anti-pERK1/2 and anti-pAkt antibodies. Results. After 5 minute stimulation with IGF-I, 70% of the IGF-IR was phosphorylated in the cell line CSC 1595 and 25% in MCF-7. In addition, Akt (oncogene protein v-akt) and ERK1/2 (extracellular signal-regulated MAP kinases) were phosphorylated. Basal and stimulated levels of phosphorylated ERK1/2 were substantially higher compared to those in the MCF-7 cell line. Conclusions. The IGF-IR and MAPK kinase pathway involving proteins ERK1/2 showed more significant phosphorylation in the 1,595 cells compared to the observed in the MCF-7 cell line. Since the IGF-IR is the major activator of this pathway it may play an important role in ductal infiltrating breast cancer tumor growth and metastases.

Estudio inmunocitoquímico y molecular de cultivo primario de tejido molar / Immunocytochemical and molecular studies with primary cultures of molar tissue

Introducción. La enfermedad trofoblástica gestacional comprende un conjunto de patologías caracterizadas por crecimiento e invasión anómalos del trofoblasto. Las bases moleculares de esta patología son desconocidas, en parte por la dificultad para disponer de modelos biológicos adecuados. Se plantea que el sistema de factores de crecimiento similares a la insulina puede tener un papel fundamental en el desarrollo de la enfermedad. Objetivo. Caracterizar cultivos primarios de placentas de primer trimestre provenientes de pacientes con mola hidatidiforme completa y aborto espontáneo no molar mediante morfología, inmunocitoquímica y expresión diferencial de algunos genes del sistema de factores de crecimiento similares a la insulina. Materiales y métodos. Se empleó inmunocitoquímica para determinar células trofoblásticas y detección por transcripción reversa y reacción en cadena de la polimerasa de genes del sistema de factores de crecimiento similares a la insulina asociados al tipo celular. Resultados. La morfología evidenció heterogeneidad de los cultivos, incluidas células mesenquimales, trofoblásticas y de decidua. El contenido de células de trofoblasto con citoqueratina-7 (marcador específico) estuvo entre 16 y 37 por ciento. La expresión de genes corroboró la presencia de trofoblasto por medio del ARNm del factor II de crecimiento similar a la insulina, en tanto que los transcritos de la hormona de crecimiento variante evidenciaron la presencia de sincitiotrofoblasto. El factor I de crecimiento similar a la insulina y la proteína de unión tipo 1 se relacionaron con células mesenquimales y de decidua. Se observó una mayor expresión del factor II de crecimiento similar a la insulina en tejidos molares en comparación con aborto no molar. Conclusiones. Los resultados mostraron la utilidad de combinar tres metodologías, morfología, inmunocitoquímica y expresión de genes, como herramientas para la caracterización y seguimiento de cultivos placentarios a partir....

Introduction. Gestational trophoblastic disease includes a group of pathologies characterized by abnormal trophoblast growth and invasion. The molecular bases of the disease are largely unknown, due in part to the lack of appropriate biological models. The insulin-like growth factor (IGF) system plays a fundamental role in the growth and development of many tissues and is involved in the progression of several diseases. Objectives. Primary cell cultures derived from first trimester placenta were characterized from patients with complete hydatidiform mole and spontaneous non molar abortion by immunocytochemical and molecular methods. Materials and Methods. The immunocytochemical method used specific markers for trophoblastic cells, whereas RT-PCR was used to identify insulin-like growth factor gene expression. Results. Histochemical staining with hematoxilin-eosin revealed that the cultures contained heterogeneous cell types, including trophoblast and endometrial decidual cells. The ratio of trophoblast cells in the cultures varied between 16% and 37%, as detected by cytokeratine-7 as the specific trophoblast marker. Gene expression analysis corroborated the presence of trophoblasts by detecting insulin-like growth factor II mRNA, whereas GH-V transcripts were correlated with the presence of syncitiotrophoblasts. Insulin-like growth factor I and insulin-like growth factor binding protein 1 mRNAs were related to mesenchyimal and decidual cells, respectively. Higher insulin-like growth factor II expression levels were found in molar tissues in comparison with non-molar abortions. Conclusion. By combining three methodologies—morphology, immunocytochemistry and gene expression, characterization and follow-up of placenta cultures from abnormal tissues is found to facilitate diagnosis.

Extracción de ADN, ARN y proteínas de células cervicales provenientes de cepillados cervicales tomados para citología cérvico-uterina / DNA, RNA and Protein extraction from exfoliated cervical cells taken

Introducción: La citología cérvico-uterina (CCU) en el método más empleado en el tamizaje de lesiones precancerosas de cuello uterino. Sin embargo, la CCU tiene una proporción importante de falsos positivos y negativos, y sólo una minoría delesiones precancerosas identificadas desemboca en cáncer de cuello uterino.Objetivo: Analizar si de los cepillados cervicales es posible extraer ADN, ARN y proteínas útiles para estudios de marcadores de carcinogénesis cervical.Métodos: Se recolectaron 281 cepillados cervicales. ADN, ARN y proteínas de las células cervicales fueron extraídos empleando Trizol. Se realizó PCR para el gen de la beta globina, para evaluar el ADN extraído y RT-PCR de GAPDH y UBC, para evaluar el ARN extraído. Mediante PCR en tiempo real se cuantificó el número de copias de UBC. Las proteínas fueron cuantificadasempleando el método del ácido biscinconínico. Resultados: Nueve muestras fueron negativas para PCR de beta globina (3,2%). Otras nueve fueron negativas para RT-PCRde GAPDH (3,2%), pero 176 fueron negativas para RT-PCR de UBC. Las 105 muestras restantes fueron positivas para UBC empleando PCR en tiempo real. Las proteínas extraídas estuvieron en el rango de 30 a 4559 [mi]g/ml, dos de las 281 muestras fueron negativas para proteínas por el método del ácido biscinconínico. Conclusión: De los cepillados cervicales se puede extraer ADN, ARN y proteínas útiles para la búsqueda de marcadoresmoleculares en cáncer de cuello uterino; sin embargo, por el tipo de muestra analizado se recupera menos ARN. El usode RT-PCR de GAPDH para evaluar la calidad del ADN complementario sintetizado puede dar falsos positivos debido a la presencia de seudogen procesado. Se recomienda el uso de otros genes constitutivos como UBC.

Introduction: Papanicolau (Pap) test is the most employed screening test for precancerous cervical lesions. However, this test has an important proportion of false positives and false negatives, only a minority of the identified lesions will progress to cancer. Objective: To evaluate the remnant of cervical scrapes after the preparation of the slide as source of DNA, RNA and proteinsfor search of molecular markers of progression of precancerous lesions.Methods: DNA, RNA and proteins were extracted from 281 cervical scrapes using Trizol. To evaluate the quality of DNA a PCR for beta globine was used, RNA quality was tested by RT-PCR of GADPH and UBC genes. Real time PCR was used to evaluate the number of RNA copies of UBC gene. The protein level was obtained by the biscinconinic acid method. Results: Nine samples were negative for beta globin PCR (3,2%), 9 samples were negative for GAPDH RT-PCR (3,2%) and 176 samples were negative by UBC RT PCR , the remnant 105 were positive for UBC in real-time PCR. The extracted proteinswere in a rank between 30 and 4559 [mi]g/mL, two of 281 samples were negative for proteins. Conclusion: From cervical scrapes is possible to extract DNA, RNA and proteins usable in biomarkers research, however therecovery of RNA is lower, this can due to some characteristics inherent to the cervical cells. The use of GAPDH as in RT PCR to evaluate DNA quality can generate false positives due to the presence of a processed pseudogen, it is recommended the use of other constitutive gen like UBC.

Serum levels of insulin-like growth factor-I and -II and insulinlike growth factor binding protein 3 in women with squamous intraepithelial lesions and cervical cancer / Niveles séricos de los factores de crecimiento similares a la insulina I y II y su proteína 3 de enlace en mujeres con lesiones escamosas intraepiteliales y cáncer de cuello uterino

Introduction. Pap smear has limitations as a screening test for cervical cancer. A marker that allows the identification of women who are at risk of developing cervical cancer would be useful for its prevention. A growing number of studies have demonstrated an association between insulin-like growth factors (IGF) serum levels and increased risk for various cancers. Objective. To assess whether circulating IGF-I, IGF-II, or IGF binding protein 3 (IGFBP-3) were associated with cervical cancer and low-grade and high-grade squamous intraepithelial lesions (LSIL and HSIL). Materials and methods. Serum levels of IGF-I, IGF-II and IGFBP-3 were measured by ELISA. Three groups of cases were analyzed: LSIL (n = 37), HSIL (n = 57), and cervical cancer (n = 41). For each case, two controls, matched by age, were included. Control subjects were women with normal, HPV-DNA-negative Pap smear. Results. Significantly lower values of IGF-I (83.9 ng/ml versus 126.6 ng/ml, p < 0.001) and IGFI: IGFBP-3 molar ratio (0.094 versus 0.137, p < 0.001) were observed among cancer cases, as compared to their control group. Women in the highest quartile of IGF-I and IGF-I:IGFBP-3 molar ratio were at an 80 por ciento (OR = 0.2, 95 por ciento CI [0.06-0.61]) and a 77 por ciento (OR = 0.23, 95 por ciento CI [0.07- 0.73]) lower risk of cervical cancer, respectively, compared with women in the corresponding reference category. Conclusions. These data suggest that low values of IGF-I and IGF-I:IGFBP-3 molar ratio may be associated with cervical cancer.

Protein malnutrition up-regulates growth hormone receptor expression in rat splenic B lymphocytes / La desnutrición proteica estimula la expresión de receptores de la hormona del crecimiento en linfocitos B esplénicos de rata

La interacción recíproca entre los sistemas endocrino e immune ha sido objeto en la última década de numerosas investigaciones que han aportado evidencia sustancial sobre el papel del eje GH/IGF-I en el sistema inmune. Recientemente, se ha postulado que el eje GH/IGF-I ejerce una función importante en la modulación de condiciones de estrés, tales como estados catabólicos, trastornos asociados con el envejecimiento, síndrome de inmunodeficiencia adquirida y desnutrición. No se conoce aún si estos efectos son ejercidos a través de mecanismos endocrinos, autocrinos o paracrinos en los diferentes tipos de tejidos del sistema inmune. El objetivo de este estudio fue establecer los principales subtipos celulares linfoides que son blanco de la acción de la hormona de crecimiento. Además, se estudió el efecto regulador del estrés inducido por la desnutrición proteica sobre la distribución relativa de células linfoides positivas al receptor de GH (GHR). Ratas normales se sometieron a dietas isocalóricas de contenido variable de proteína (0, 4, 8, 12 y 20 por ciento) durante 14 días y se aislaron los linfocitos de bazo, ganglios linfáticos y sangre periférica. Mediante citometría de flujo se analizó la unión a Fluos-rrGH y los linfocitos CD4+, CD8+ y B se definieron empleando anticuerpos monoclonales específicos marcados con PE. Se encontró que el patrón de expresión de GHR varía con el tejido y tipo celular linfoide. El bazo es el órgano más sensible al déficit de proteína, y la mayor expresión de receptores para GH se presenta en las células B seguidas por las células CD4+. Al reducir el contenido de proteína en la dieta de 20 por ciento a 0 por ciento se observó un incremento del 12 por ciento al 52 por ciento en el número de células B positivas para el receptor de GH y del 8 por ciento al 17 por ciento en las células CD4+ positivas para GHR en el bazo. En contraste, sólo el 10 por ciento -13 por ciento de linfocitos de los ganglios linfáticos y 2 por ciento -4 por ciento de la sangre periférica presentaron receptores para GH en su superficie, los cuales no se vieron afectados significativamente por el déficit de proteína. En conclusión, el incremento en los receptores para GH en linfocitos bajo estrés catabólico inducido por la restricción en proteína, apoya la hipótesis del papel modulador del eje GH/IGF-I en la preservación de la homeostasis del sistema inmune

Serum IGF-I and IGFBP-3 levels in pregnant adolescents in an economically depressed community

The growth hormone (GH) insulin-like growth factor-I (IGF-I) axis is believed to play a role in growth during postnatal and fetal life and is regulated by nutrition. However, very few studies have examined the effects of malnutrition on the regulation of the GH/IGF-I axis in human pregnancy during adolescence. In this study we compared the serum IGF-I and IGFBP-3 levels in a group (n=62) of pregnant adolescents in their second trimester of pregnancy and living in a poor area in the city of Bogotá, with those of a group (n=36) of non-pregnant adolescents from the same area. As reference, a group (n=20) of non-pregnant adolescents from a middle-class district in the same city was utilized. It was observed that the non-pregnant adolescents from the poor area were all below the 3rd percentile and showed significantly (p<0.05) reduced height and weight in comparison with subjects from middle-class area, suggesting growth retardation in this group of subjects. Serum IGF-I and IGFBP-3 levels were significantly (p<0.0001) reduced, in comparison with subjects from the middle-class area, although there was no evidence of delay of puberty based on Tanner stage of sexual development and only subjects at Tanner 5 were included in this study. When the serum concentrations of IGF-I and IGFB-3 in the population of pregnant adolescents were investigated, no differences were found with those observed in the non-pregnant adolescents from the poor district, which means that pregnancy was not accompanied by the elevation in IGF-I levels observed in normal pregnancies. In conclusion, the low circulating IGF-I levels observed in pregnant adolescents could mirror abnormalities on the normal physiology of the GH/IGF-I axis, whose effects on fetal growth are not completely understood

Reliability of the western ligand blot method for the simultaneous relative estimations of serum insulin-like growth factor binding proteins (IGFBPs) / Confiabilidad del método de \"western ligand blot\" para la determinación simultánea de las proteínas de unión de los factores de crecimiento similares a la insulina (IGFBPs) en suero

It is well established that nutrition is an important regulator of both serum insulin-like growth factor-I (IGF) and its binding proteins (IGFBPs). The Western ligand blot method (WLB) for simultaneous determinations of IGFBPs in serum or plasma sambples was evaluated and validated with emplasis on its reproducible capabilities. After electrophoretic separation and transfer, the membranes were incubated with a mixture of recombinant labeled human (GF-I/IGF-II(rhIGF-II) and band intensities measured by autoradiography. The typical electrophoretic profile for pig serum, as determined with molecular weight markers, showed four mainbands of approximately 42-39,32,30-28 and 24 kDa which seemed to correspond to IGFBP-3, IGFBP-2, IGFBP-1 and IGFBP-4 respectively. Likewise, a trinlet of approximately 42-39 kDa (IGFBP-3), a broad area called OGFBP-30 region (most probably IGFBP-1, -2 and -3 variants) and a third band of 24 kDa IGFBP-4) were seen in rat samples. Determination of IGFBP/2 and 1 in rat serum samples, as two separate bands on 12 por ciento gels was difficult due to their close electrophoretic migration and possibly to the reported lower levels of IGFBP-2 in adult rat serum. Dilutions tested on 0.2 µm nitrocellulose membranes with samples volumes between 0.25 to 1.5 µl(1:10-1:60 dilutions), showed IGFBPs curves with good linearity which suggest first, that there exist a quantitative relation betweem the amount of each protein and densitometric response and second, that the transfer of the proteins was linear across the range of 0.25 to 1.5 µl(1:10-1:60 dilutions). Moreover, the results also suggest that losses were aqually spread and that the proteins retained their binding pro[erties after the process. Reproducibility showed intra-assay coefficients of variation (CVs) of 15 per cent or lower using either a transfer device without cooling system or a combination of a transferdevice with cooling system and manually defined band boundaries. In summary, it was shown that the optimized experimental conditions here described for the WLB method, allow realiable simultaneous measurements of the main pig and rat serum IGFBPs and therefore, could be utilised to detect changes in the profile after dietary manipulations

Obtención y caracterización de un anticuerpo específico contra la hormona luteinizante humana / Obtention and characterization of a specific antibody against human luteinizing hormone

En el presente trabajo se describe la obtención del anticuerpo policlonal específico contra la hormona luteinizante humana (HL). la Hormona fue purificada a partir de una fracción rica en glicoproteínas, obtenida de hipófisis humanas, siguiendo el método desarrollado previamente en el proyecto basado en diferencias de solubilidad y constante dieléctrica entre las diferentes proteínas. El antisuero específico se obtuvo por inoculación del antígeno en conejos raza Nueva Zelanda y su producción controlada valorando el título por RIA. La caracterización parcial del antisuero se realizó mediante la determinación del título óptimo, afinidad, especificidad y su aplicabilidad para la cuantificación en términos de curva estándar y control de calidad, en comparación con un antisuero de referencia internacional. Los resultados indicaron que el anticuerpo obtenido puede emplearse en la cuantificación del HL por RIA